热门:【精彩回顾】“CSCB细胞死亡研究分会”Webinar第六期精华纪要

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文章|屈珍、周仕杰、嘉克龙年11月27日晚7:00，中国细胞生物学学会细胞死亡研究分会开展在线学术交流系列讲座第6期，此次讲座通过在线平台“腾讯会议”进行，主讲人是清华大学生命科学院葛 在人体中，分泌蛋白与许多生理活动相关，同时约15%的全部表达蛋白是分泌型蛋白。 分泌蛋白向细胞外转运的过程分为古典和非古典两种分泌途径。 经典的蛋白分泌途径依赖于内质网和高尔基体，同时这种蛋白具有信号肽，通过信号肽介导蛋白的跨膜运输。 另一方面，依赖于非经典分泌途径的分泌蛋白不含信号肽，不经由内质网到高尔基体的经典运输途径。 非经典的分泌途径被分类为各种不同的蛋白质输送类型，如直接通过膜上形成的孔产生细胞的蛋白质输送类型，以及通过膜泡输送的蛋白质输送类型。 但是，膜泡介导的分泌过程中存在的一个重要问题是这些蛋白质是如何越过膜进入膜泡的。 在这次讲座中，葛亮研究员就今年4月30日在cell杂志上发表的名为“atranslocationpathwayforvesicle-mediatedunconventionalproteinsecretion”的研究论文进行了系统介绍 mature il-1β(mil-1β)可以通过非经典的蛋白质运输途径分泌细胞，葛亮研究员团队首次聚焦于一次跨膜运输蛋白tmed10，探讨il-1β的跨膜运输机制。 他们首先联合二氢叶酸还原酶系统( dhfr )、蛋白质交联和质谱技术筛选与mature il-1β(mil-1β)运输相关的蛋白质，筛选tmed10，免疫细胞系mpdm/thp-1。 为了明确tmed10的生理学意义，他们利用髓系tmed10敲除小鼠，建立结肠扎穿孔术( clp )诱导的败血症性休克模型，利用该模型在体内炎症环境下tmed10为mil-1β 在进一步开展中，他们构建了不同域较短的tmed10，使用duolink pla和蛋白质免疫共沉淀技术进行了检查，结果表明ct域和gold域对tmed10和Mil1β的相互作用很重要，ct域是可能的 进而，tmed10是只参与mil-1β的运输，还是其介导的运输活动具有一定的广谱性？ 为了回答这个问题，他们验证了其他非经典途径运输的分泌蛋白( il-1家族成员、hspb5、galectin-1/3、annexin a1、tau等)，tmed10影响上述蛋白的分泌 其次他们通过序列分解发现许多依赖tmed10的分泌蛋白含有保守的motif-1，通过变异和mcherry荧光蛋白融合两种方法验证了该motif对蛋白质分泌的重要性。 然后，他们通过蛋白酶k分解保护实验说明tmed10通过mil-1β进入膜泡，辅助体外模型证实了tmed10直接通过mil-1β进入脂质体。 因为mil-1β的跨膜运输需要维持未折叠的线性化状态，所以之后在通过tmed10的mil-1β运输过程中进行了验证。 通过dhfp系统和cargo pre-unfolding assay，他们证实了线性转运体及其motif-1和tmed10的相互作用共同保证了蛋白质转运体的效率。 另外，胞浆蛋白hsp90a和内质网腔内蛋白hsp90b1均促进了mil-1β的膜间运输效率。 其次，他们用免疫电子显微镜检测包括tmed10和mil-1β在内的一系列非经典转运体分泌蛋白的共定位，辅助荧光互补实验，细胞内非经典转运体分泌蛋白最终富含tmed10的内质网高尔基 另外，他们发现参与mil-1β运输过程时tmed10显示出高比例的低聚化，gold域的活性化对tmed10的低聚化是不可或缺的。 temd-10介导的非经典蛋白分泌途径( tmed10-channeled usp，thu )与经典蛋白分泌途径有很多不同的优点: thu运输的货物蛋白不存在经典途径信号肽，但共同的motif-1， 在经典路径中，sec61在粗糙面内质网膜上形成了多次贯通膜的蛋白质输送路径，但在thu中，temd-10受到货物蛋白质的控制而低聚化，在ergic上形成了一次贯通膜的蛋白质路径，控制型蛋白质成分 另外，经典的途径是需要bip和srp等辅助因子的参加，可以在蛋白质翻译的过程中偶联运输，但thu需要hsp90a和hspb1的参加，运输过程需要维持蛋白质没有折叠的线性化状态。 葛亮集团的本事业是用ergic (来自自食体膜的细胞器)结合自食型分泌( secretory autophagy )和同事业的thu进行区别，自食型分泌是通过ergic组成的囊肿的吞噬融合形成双层膜结构的自食体，制作运转的货物。 在该事业中，在巨噬细胞形成之前，发现不含信号肽的蛋白质货物特异性进入THU GIC，位于巨噬细胞的双层膜之间，通过外膜和质膜的融合以游离的形式释放到细胞外。 在这次研讨会上，参加者进行了频繁的互动，就如何用生物化学手段验证temd-10形成的蛋白质通道的科学问题展开了热烈的讨论。 temd-10形成的蛋白质通道对货物蛋白的特异性是否与辅助蛋白有关生命体内存在的两个不同的蛋白质分泌途径有什么生理意义？ 例如，是无法在细胞内内化的折叠小姐蛋白的凝聚而释放出稳定的压力的应激反应，或者蛋白质通过thu分泌到细胞外，或者 会场讨论活跃起来，会议圆满结束 下期讲座预告发表人:邹李龙讲座主题: cytochrome p 450 oxidoreductasecontributestopholipidperoxidationinferroptosis.( naturechemicalbiologs ) 资料来源: cscb细胞死亡研究分会1980-喜欢这个文案的人也喜欢原来的标题:《【精彩的回顾】《cscb细胞死亡研究分会》webinar第六期精华简介》原文